Penentuan Kondisi Optimal Annealing Amplifikasi Promotor 35s Jagung (Zea Mays L.) Transgenik Penyebab Hipersensitivitas Menggunakan Dua Primer P35s Camv

mustika dewanti;

Rekayasa genetika bahan pangan dapat menghasilkan alergen atau toksin yang menyebabkan reaksi hipersensitif. Deteksi tanaman transgenik ditandai dengan kemampuan primer mengamplifikasi promotor 35S Cauliflower Mosaic Virus (CaMV) yang merupakan komponen konstruk tanaman transgenik. Penelitian bertujuan untuk menentukan kondisi optimal annealing amplifikasi promotor 35S pada jagung transgenik menggunakan dua pasang primer. Penelitian diawali dengan isolasi DNA jagung. DNA diamplifikasi dengan kondisi denaturasi awal selama 3 menit pada suhu 94°C, denaturasi pada suhu 94°C selama 1 menit, dilakukan variasi kondisi annealing pada suhu 55°C; 59°C; 65°C; 69°C masing- masing selama 40 detik dan 60 detik, ekstensi pada suhu 72°C selama 1 menit sebanyak 30 siklus dan ekstensi akhir pada suhu 72°C selama 3 menit. Visualisasi amplikon dengan elektroforesis menggunakan gel agarosa dalam dapar TBE 1X dengan tegangan 50 V selama 40 menit. Hasil penelitiaan kondisi annealing yang membentuk pita DNA yang paling jelas dan tidak smear adalah suhu 65°C selama 40 detik.