Daun jambu mete (Anacardium occidentale L.) dilaporkan berperan dalam menghambat aktivitas α-glukosidase. Metabolit sekunder sebagai penghambat α-glukosidase dapat diperoleh dari mikroba endofit. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengisolasi dan mengetahui aktivitas penghambatan α-glukosidase in vitro metabolit kapang endofit daun jambu mete. Kapang endofit diisolasi dengan metode tanam langsung pada medium PDA. Isolat kapang endofit dikultivasi dalam medium cair PDY, selanjutnya supernatan difraksinasi menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat dan n-butanol. Absorbansi paranitrofenol diukur dengan microplate reader pada panjang gelombang 415 nm. Hasil menunjukkan diperoleh enam isolat kapang endofit dari daun jambu mete yang dapat menghambat α-glukosidase, yaitu IDJM-1.1a, IDJM-2.4a, IDJM-3.3a, IDJM-4.1b, IDJM-5.2bdan IDJM-6.2c. Analisis kromatografi lapis tipis ekstrak IDJM-3.3a menunjukkan keberadaan golongan senyawa flavonoid dan tanin. Metabolit ekstrak etil asetat (200 μg/ml) IDJM-3.3a tersebut menghasilkan persentase penghambatan α-glukosidase tertinggi sebesar 49,1298%.